ICG-溶菌酶，吲哚箐绿标记溶菌酶，Lysozyme，酶活性研究
CY5-溶菌酶——近红外荧光赋能的天然抗菌“可视化工具”
CY5-溶菌酶是由“天然抗菌蛋白溶菌酶”与“近红外荧光染料CY5”通过共价键偶联形成的功能性复合物，并非单一化学物质，核心优势在于兼具溶菌酶的细菌裂解活性与CY5的近红外追踪能力，能解决传统溶菌酶“作用过程不可见”的问题，广泛用于微生物研究、食品防腐监测等领域。
从成分本质看，溶菌酶是天然碱性球蛋白，归属于糖苷水解酶家族，由129个氨基酸残基构成紧密球状结构，活性中心的谷氨酸和天冬氨酸可特异性水解革兰氏阳性菌细胞壁肽聚糖的β-1,4糖苷键，导致细菌破裂死亡；CY5是人工合成的吲哚菁类染料，分子核心为双吲哚共轭骨架，荧光波段处于700-900nm“生物组织光学窗口”，穿透性强且生物背景荧光干扰低。
制备需分三步：第一步提取溶菌酶，主流从鸡蛋清中获取，经4℃离心去除卵黄杂质，用30%饱和度硫酸铵盐析沉淀蛋白质，再通过阳离子交换层析纯化；
第二步活化CY5，将CY5与N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）在二环己基碳二亚胺（DCC）活化下反应，生成含活性酯基团的CY5-NHS酯；第三步偶联反应，将溶菌酶溶于pH7.2的PBS缓冲液，按1:1.2摩尔比加入CY5-NHS酯，室温避光搅拌1小时，透析去除游离CY5，冷冻干燥后得到淡黄色粉末状成品。 理化特性上，该复合物易溶于水，水溶液呈弱碱性（pH6.8-7.5）；40℃以下酶活性稳定，80℃加热5分钟仍保留25%活性，CY5荧光在pH5.0-9.0范围内无明显猝灭，激发波长649nm、发射波长670nm；对金黄色葡萄球菌的抑制率达92%，且无毒性、生物相容性优异，符合食品与医药领域安全标准。 分子链接依赖特异性反应：溶菌酶分子表面赖氨酸残基的伯氨基（-NH₂）提供亲核位点，CY5-NHS酯的琥珀酰亚胺酯基团（-CO-O-NHS）提供亲电位点。中性条件下，氨基孤对电子攻击活性酯羰基碳，琥珀酰亚胺作为离去基团脱离，形成稳定的酰胺键（-CO-NH-），将两者共价连接，且不破坏溶菌酶活性中心与CY5荧光结构，实现“抗菌+追踪”双重功能。
