SS31-PEG-DOX，SS31肽-聚乙二醇-阿霉素，药物载体构建反应

分子构建方式（分步共价偶联流程）

构建逻辑：先连接 “SS31-PEG”，再通过连接子偶联阿霉素，优先保留三者的生物活性与反应特异性。

原料选择

SS31 肽：保留 N 端氨基（-NH₂）或 C 端羧基（-COOH）作为活性位点，确保靶向功能不受破坏。

PEG 衍生物：选用 “双端不同活性基团” 的 PEG，如 NHS-PEG-MAL（一端为 NHS 活性酯，另一端为马来酰亚胺），分别适配 SS31 肽和阿霉素的连接需求。

阿霉素：利用其分子结构中的氨基（-NH₂）作为与 PEG 连接的活性位点。

分步构建流程

第一步：SS31 肽与 PEG 的酰胺键偶联将 SS31 肽溶于中性缓冲液（PBS，pH 7.0-7.4），加入过量的 NHS-PEG-MAL（摩尔比 SS31:PEG=1:1.2-1:2），室温搅拌反应 4-6 小时。SS31 肽的氨基（-NH₂）与 PEG 的 NHS 活性酯发生亲核取代反应，形成稳定的酰胺键（-CO-NH-），得到中间产物 SS31-PEG-MAL。

第二步：SS31-PEG 与阿霉素的偶联若阿霉素直接偶联，可将其氨基与 PEG 另一端的马来酰亚胺通过 “氨基 - 马来酰亚胺加成反应” 连接；或先将阿霉素通过琥珀酰亚胺酯活化，再与 SS31-PEG 的氨基形成酰胺键。若引入敏感连接子（如 pH 敏感的腙键、酶敏感的肽键），需先将连接子修饰在 PEG 末端，再与阿霉素的氨基反应，构建 SS31-PEG - 连接子 - 阿霉素。

第三步：纯化通过透析（截留分子量 5000-10000 Da）去除未反应的游离 SS31 肽、阿霉素及小分子杂质，再经高效液相色谱（HPLC）纯化，冷冻干燥得到纯品。

关键反应类型及特点

核心偶联反应：氨基 - NHS 活性酯酰胺化反应（SS31 与 PEG 连接）

反应式：SS31-NH₂ + NHS-PEG-MAL → SS31-CO-NH-PEG-MAL + NHS（副产物）

反应条件：室温、中性 pH，无需高温高压，避免破坏 SS31 肽的靶向活性和 PEG 的结构稳定性。

优势：选择性高，反应效率达 80% 以上，产物稳定性强。

核心偶联反应：氨基 - 马来酰亚胺加成反应（PEG 与阿霉素连接）

反应式：SS31-PEG-MAL + 阿霉素 - NH₂ → SS31-PEG-NH-CH₂-CH (SH)-CO - 阿霉素（形成稳定硫醚键）

反应条件：pH 6.5-7.5，室温反应 3-5 小时，氮气保护避免氧化。

优势：反应温和，不影响阿霉素的化疗活性，连接稳定性高。

辅助反应：连接子修饰反应（若需可控释放）

若引入 pH 敏感腙键：阿霉素的氨基与醛基修饰的 PEG 发生缩合反应，形成腙键（-N=N-CH-），在肿瘤酸性环境下可水解释放阿霉素。

反应条件：pH 5.0-6.0，室温反应 8-12 小时，后续透析去除未反应试剂。