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CY5-溶菌酶,花青素CY5标记溶菌酶,追踪溶菌酶动态

CY5 - 溶菌酶 —— 解锁抗菌机制可视化的近红外功能分子

CY5 - 溶菌酶是一款融合 天然抗菌活性近红外荧光追踪的创新复合物,化学本质是 溶菌酶(生物蛋白)“CY5(合成荧光染料)的共价偶联物,打破传统溶菌酶 只知其效、不见其踪的局限,为微生物检测、医药研发提供直观研究工具,其成分特性、制备工艺、理化表现与分子链接逻辑均围绕 功能协同设计。


核心成分中,溶菌酶是天然存在的糖苷水解酶,非化学合成小分子,从鸡蛋清、人乳等提取或基因工程生产,分子含 129 个氨基酸,球状结构的活性中心能精准破坏细菌细胞壁,对革兰氏阳性菌高效抑制;CY5 是专为深层组织成像设计的荧光染料,合成过程需构建双吲哚共轭碳链,确保荧光处于近红外波段,减少生物组织吸收与散射。


制备流程注重 活性保留:溶菌酶提取选鸡蛋清为原料,因含量高(约 3.5g/L),经低温离心(4℃5000rpm)去杂质,用 20%-40% 饱和度硫酸铵盐析沉淀,再经 Sephadex G-75 凝胶层析纯化,得纯度 98% 以上产品;CY5 需先合成 CY5-NHS 酯,通过 CY5 羧基与 NHS DCC 活化下反应,引入活性酯基团;偶联阶段控制温度 25℃、反应时间 60 分钟,避免高温破坏酶活性,用 0.22μm 滤膜过滤除杂质,最后冷冻干燥,防止高温导致荧光猝灭。

理化特性适配多场景应用:溶解性好,20℃时水中溶解度达 20%,可配制成不同浓度的检测液;稳定性突出,在避光、4℃条件下储存 6 个月,酶活性与荧光强度均无明显下降;兼容性强,与食品中的蛋白质、碳水化合物无相互作用,可用于食品防腐检测;且荧光信号强,即使稀释 100 倍,仍能通过荧光显微镜清晰观察。

分子链接的关键是 位点精准:溶菌酶分子表面有 5 个赖氨酸残基,仅暴露在分子表面、远离活性中心的赖氨酸氨基参与反应,避免影响酶活性;CY5-NHS 酯的活性酯基团只与氨基反应,不与溶菌酶的羟基、羧基作用,确保链接特异性。反应中,氨基(-NH₂)进攻 CY5-NHS 酯的羰基(C=O),形成酰胺键,这种链接方式键能高(约 350kJ/mol),在生理环境中不易断裂,保证复合物在追踪过程中结构稳定,实现从 细菌接触细胞裂解的全程可视化。



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